PCR to badanie, które jest wykorzystywane przy diagnozowaniu wielu schorzeń. Metoda PCR pozwala na wykrycie obecności bakterii w DNA. Sprawdźmy, na czym polega technika PCR i dlaczego wyniki uzyskane przy użyciu tej metody są tak precyzyjne,
Czym jest PCR?
PCR to sterowany enzymatycznie proces amplifikacji krótkich regionów DNA in vitro. Metoda opiera się na znajomości przynajmniej częściowych sekwencji docelowego DNA i wykorzystaniu ich do zaprojektowania starterów oligonukleotydowych, które hybrydyzują specyficznie z sekwencjami docelowymi. W PCR docelowy DNA jest kopiowany przez termostabilny enzym polimerazę DNA w obecności nukleotydów i starterów. Poprzez wiele cykli ogrzewania i chłodzenia w termocyklerze w celu wytworzenia rund denaturacji docelowego DNA, hybrydyzacji starterów i wydłużania starterów, DNA docelowy jest amplifikowany wykładniczo. W teorii, stosując tę można wygenerować miliardy kopii docelowego DNA z pojedynczej kopii w mniej niż 1 godzinę. Wszystko to sprawia, że PCR znajduje szerokie zastosowanie w naukach biomedycznych i jest powszechnie stosowane przy wykrywaniu chorób zakaźnych.
Metoda PCR – innowacje
W ostatnich latach metoda PCR została znacznie zmodyfikowana, aby zwiększyć jej użyteczność i wszechstronność. Multiplex PCR umożliwia jednoczesne wykrywanie kilku sekwencji docelowych poprzez włączenie wielu zestawów starterów. Aby zwiększyć czułość i swoistość, można przeprowadzić podwójną amplifikację z odpowiednio zaprojektowanymi „zagnieżdżonymi” starterami. Amplifikację można uczynić mniej swoistą w celu wykrycia rozbieżnych genomów poprzez losowy dobór części zestawów starterów. Co więcej, możliwe jest wykrycie RNA przez przekształcenie go w komplementarną kopię DNA, a następnie amplifikację (tak zwana PCR z odwrotną transkryptazą lub RT-PCR), umożliwiając ocenę wirusów RNA lub organizmów zdolnych do życia.
Diagnostyka PCR
Diagnostyka oparta na PCR została opracowana dla szerokiej gamy drobnoustrojów. Ze względu na niesamowitą czułość, specyficzność i szybkość amplifikacji, testy PCR są rekomendowane przez ekspertów chorób zakaźnych do identyfikacji organizmów, których nie można hodować in vitro lub w przypadkach, gdy istniejące techniki hodowlane wymagają przedłużonych czasów inkubacji.
Wraz z rosnącą liczbą sekwencjonowanych genomów patogenów zakaźnych, katalogi genów mogą być wykorzystywane do projektowania przydatnych klinicznie testów diagnostycznych. W rezultacie w ciągu ostatniej dekady testy PCR, dostępne w ofercie Gentaur Sp. z o.o., cieszą się coraz większym zainteresowaniem wśród podmiotów z branży biomedycznej.